从血液中分离纯化清蛋白的两种常用方法包括:
离子交换层析
原理:离子交换层析是根据蛋白质带电性的差异进行纯化。在血浆经过除盐处理或乙醇冷沉后的组分,以适宜的pH值和离子强度流经离子交换填料,通过改变溶液条件(如pH、盐浓度)来吸附和洗脱蛋白,从而达到分离的目的。
优点:这种方法适用于大多数血液制品,并且在去除内毒素方面具有优势。
亲和层析
原理:亲和层析利用生物分子间的特异性吸附原理来分离蛋白。目的蛋白可经偶联特异性配基(如肝素、赖氨酸、明胶等)的填料纯化,带有Fc-tag或含抗体成分的血浆蛋白可使用Protein A亲和填料。
优点:亲和层析具有高纯度和高收率,通常只需一步处理即可从复杂的蛋白质混合物中分离出目标蛋白。
这两种方法各有优势,具体选择哪种方法取决于实验需求和目标蛋白的特性。在实际应用中,可能会结合多种方法以达到最佳的纯化效果。
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